ELISPOT para niños
El ELISpot es un método muy útil que se usa para observar cómo reacciona el sistema de defensa de nuestro cuerpo (el sistema inmune) en humanos y animales. Fue creado por Cecil Czerkinsky en 1983.
Los ensayos ELISpot se basan en una técnica similar a los ELISA, que son otros tipos de pruebas de laboratorio. Al principio, el ELISpot se usó para contar las células B que producen anticuerpos específicos. Luego, se adaptó para identificar y contar células que producen citoquinas, que son como mensajes especiales que las células usan para comunicarse.
Con las condiciones adecuadas, un ensayo ELISpot puede mostrar cada célula que está produciendo una sustancia o que está activada. Esto se logra al ver el producto que secretan. Así, los ensayos ELISpot nos dan información sobre qué tipo de sustancia se produce y cuántas células están reaccionando.
Los ensayos ELISpot son muy sensibles. Esto significa que pueden detectar células que son muy pocas en número, como las que reaccionan a una sustancia específica. Esto era muy difícil de hacer antes. Esta gran sensibilidad se debe a que la sustancia que la célula produce es capturada rápidamente justo alrededor de la célula. Así, no se dispersa ni se pierde. Por eso, los ensayos ELISpot son mucho más sensibles que los ELISA normales.
¿Cómo funciona el ELISpot?
Como mencionamos, los ensayos ELISpot usan una técnica parecida a los ELISA. Se utiliza una placa especial con muchos pequeños huecos, llamados micropocillos. El fondo de estos micropocillos está cubierto con anticuerpos de captura. Estos anticuerpos se eligen porque se unen a la sustancia que queremos estudiar.
Después, se cubre la placa con un suero especial que no reacciona con los anticuerpos. Luego, se colocan las células que nos interesan en los micropocillos, junto con una sustancia que las estimula, como un antígeno (algo que el sistema inmune reconoce). La placa se incuba a 37 °C en una atmósfera con dióxido de carbono por un tiempo. Algunas sustancias, como las proteínas, necesitan ser preparadas por otras células antes de ser presentadas a las células T.
La sustancia que producen las células es capturada justo donde está la célula, por los anticuerpos que están en el fondo del micropocillo. Después de lavar la placa para quitar las células y los restos, se añaden otros anticuerpos marcados con biotina. Estos anticuerpos se unen a diferentes partes de la sustancia capturada y ayudan a detectarla.
Se lava la placa de nuevo para eliminar los anticuerpos que no se unieron. Finalmente, se añade una mezcla de avidina y una enzima llamada HRP, junto con un sustrato de reacción (como BCIP o NBT). La avidina se une muy fuertemente a la biotina de los anticuerpos marcadores. La enzima unida a la avidina reacciona con otra sustancia, lo que hace que el sustrato se vuelva de color y forme un punto.
Este punto de color, que suele ser negro azulado, marca el lugar donde había una célula que estaba produciendo la sustancia. Los puntos se pueden contar con un microscopio o con una máquina especial que toma fotos de los micropocillos y los analiza para saber cuántos puntos hay y de qué tamaño son.
Ensayo FluoroSpot: Una variación
El ensayo FluoroSpot es una versión modificada del ELISpot. En este caso, se usan varios anticuerpos marcados con diferentes colores fluorescentes. Esto permite identificar células que están produciendo dos (o más) sustancias al mismo tiempo en el mismo ensayo.
Véase también
En inglés: ELISpot Facts for Kids
- ELISA
- Inmunoensayo
